蛋白質(zhì)糖基化位點(diǎn)檢測:用酶或化學(xué)脫糖基化、通過選擇性標(biāo)記或通過凝集素親和層析法是檢測蛋白糖基化常用方法。
科研實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如MBC?有適合各種細(xì)胞培養(yǎng)的血清,尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞,如:干細(xì)胞、肝細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞,原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等。
pH測量通常有比色法(pH試紙或比色皿)和電極法二種。比色法當(dāng)然不要標(biāo)定,而電極法就一定要標(biāo)定,因?yàn)殡姌O法pH測量就是將未知溶液與已知pHs值的標(biāo)準(zhǔn)溶液在測量電池中作用比較測定,這是電極法pH測量的“操作定義”所決定的。
PCR擴(kuò)增DNA的原理是:先將含有所需擴(kuò)增分析序列的靶DNA雙鏈經(jīng)熱變性處理解開為兩個(gè)寡聚核苷酸單鏈,然后加入一對(duì)根據(jù)已知DNA序列由人工合成的與所擴(kuò)增的DNA兩端鄰近序列互補(bǔ)的寡聚核苷酸片段作為引物,即左右引物。此引物范圍就在包括所欲擴(kuò)增的DNA片段,一般需20-30個(gè)堿基對(duì),過少則難保持與DNA單鏈的結(jié)合。引物與互補(bǔ)DNA結(jié)合后,以靶DNA單鏈為模板,經(jīng)反鏈雜交復(fù)性(退火),在Taq DNA聚合酶的作用下以4種三磷酸脫氧核苷(dNTP)為原料按5'到3'方向?qū)⒁镅由?、自?dòng)合成新的DNA鏈、使DNA重新復(fù)制成雙鏈。然后又開始第二次循環(huán)擴(kuò)增。引物在反應(yīng)中不僅起引導(dǎo)作用,而且起著特異性的限制擴(kuò)增DNA片段范圍大小的作用。新合成的DNA鏈含有引物的互補(bǔ)序列,并又可作為下一輪聚合反應(yīng)的模板。如此重復(fù)上述DNA模板加熱變性雙鏈解開—引物退火復(fù)性—在DNA聚合酶作用下的引物延伸的循環(huán)過程,使每次循環(huán)延伸的模板又增加1倍,亦即擴(kuò)增DNA產(chǎn)物增加1倍,經(jīng)反復(fù)循環(huán),使靶DNA片段指數(shù)性擴(kuò)增。
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)RM(reference material)是具有準(zhǔn)確量值的測量標(biāo)準(zhǔn),是具有一種或多種足夠均勻并已確定特性值的,用于校準(zhǔn)設(shè)備、評(píng)價(jià)測量方法或給材料賦值的材料或物質(zhì)。應(yīng)用于化學(xué)測量、生物測量、工程測量、無力測量等領(lǐng)域。
纖維蛋白:是人類發(fā)現(xiàn)最早的一種凝血因子,呈伸長的橢球體,是由三對(duì)多肽鏈(一對(duì)α鏈、一對(duì)β鏈、一對(duì)γ鏈)以二硫鍵連接而成的二聚物,在肝臟中合成后進(jìn)入血漿,以溶解形式存在。
為了避免雜菌污染,獲得微生物純培養(yǎng)物,培養(yǎng)基必須及時(shí)嚴(yán)格滅菌。通常采用高壓蒸汽滅菌。一般培養(yǎng)基用0. IMPa (121℃)維持15 ~ 30min即可徹底滅菌。長時(shí)間的高溫滅菌會(huì)使某些不耐熱的物質(zhì)破壞,如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖。因此,含糖培養(yǎng)基常用0.05MPa (110℃) 滅菌20 ~ 30min某些對(duì)糖類要求更高的培養(yǎng)基,可先將糖過濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合。
TRIzol試劑有多組分分離作用,與其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、鹽酸胍法、硫氰酸胍法等相比,最大特點(diǎn)是可同時(shí)分離一個(gè)樣品的RNA\DNA\蛋白質(zhì).TRIzol使樣品勻漿化,細(xì)胞裂解,溶解細(xì)胞內(nèi)含物,同時(shí)因含有RNase抑制劑可保持RNA的完整性。在加入lv仿離心后,溶液分為水相和有機(jī)相,RNA在水相中。取出水相用異丙醇沉淀可回收RNA;用乙醇沉淀中間層可回收DNA;用異丙醇沉淀有機(jī)相可回收蛋白質(zhì)。