操作中必須有“無(wú)菌操作”的概念,所用玻璃器皿必須是完全滅菌的,不得殘留有細(xì)菌或抑菌物質(zhì)。所用剪刀、鑷子等器具也必須進(jìn)行消毒處理。樣品如果有包裝,應(yīng)用75%乙醇在包裝開(kāi)口處擦拭后取樣。操作應(yīng)當(dāng)在超凈工作臺(tái)或經(jīng)過(guò)消毒處理的無(wú)菌室進(jìn)行。瓊脂平板在工作臺(tái)暴露15分鐘,每個(gè)平板不得超過(guò)15個(gè)菌落。
菌種在分離、保藏和生產(chǎn)過(guò)程中,極易遭致雜菌污染,因此必須對(duì)染有雜菌的菌種進(jìn)行提純,方能用于生產(chǎn)。根據(jù)污染的類(lèi)型和程度,需采用不同的純化措施。
穩(wěn)定細(xì)胞系是指將外源基因整合到宿主細(xì)胞基因組中,使外源基因能夠在宿主細(xì)胞中長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá),這樣的細(xì)胞系稱(chēng)為穩(wěn)定細(xì)胞系。其原理是將外源基因克隆到具有某種抗性的載體上,通過(guò)轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞,外源基因整合到宿主染色體上,用載體中所含抗性基因進(jìn)行篩選即可得到成功整合目的基因的細(xì)胞。
冷凍切片技術(shù),是一種在低溫條件下使組織快速冷凍到一定的硬度,然后進(jìn)行切片的一種方法。被稱(chēng)為病理科的急診工作----在外科手術(shù)過(guò)程中,醫(yī)生切取部分腫瘤組織或其它病變標(biāo)本,送檢到病理科通過(guò)快速冷凍標(biāo)本制作切片,病理科診斷醫(yī)師對(duì)該切片進(jìn)行觀察快速做出判斷得出良、惡性結(jié)果或某種疾病的診斷。
酶與抗體交聯(lián)的方法有許多種,根據(jù)酶的結(jié)構(gòu)不同可采用不同的方法。對(duì)于制備HRP結(jié)合物,可用戊二醛二步法和過(guò)碘酸鈉法。尤以簡(jiǎn)易過(guò)碘酸鈉法更為常用。
牛源血清又分為胎牛血清、新生牛血清和小牛血清,它們的區(qū)別方式主要由于牛齡和采血方式不同,其中胎牛血清因其抗體水平含量低對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響小、生長(zhǎng)因子含量水平高利于細(xì)胞增殖而應(yīng)用最廣。
大腸桿菌(E.coli)重組蛋白表達(dá)技術(shù)經(jīng)過(guò)多年的發(fā)展,相對(duì)于其他表達(dá)體系,算是非常成熟的一個(gè)體系。大腸桿菌蛋白表達(dá)系統(tǒng)主要有以下特點(diǎn):遺傳背景清楚;易于培養(yǎng)和控制;轉(zhuǎn)化操作簡(jiǎn)單;表達(dá)水平高;成本低;周期短。
乙型肝炎核心抗原(hepatitis B core antigen,HBcAg)是單一多肽,分子量18848u。HBcAg在HBV感染中占有重要地位,他能反映血清中:Dane顆粒的存在及肝內(nèi)HBV的復(fù)制,并可與其他的HBV血清學(xué)標(biāo)志物起互相配合和互相補(bǔ)充的作用。只是由于其抗體具有很強(qiáng)的親和力,能迅速地與血清中的HBcAg結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,因而難以在血清中測(cè)得游離的HBcAg。常用ELISA和IRMA雙抗體夾心法檢測(cè)HBcAg。
抗凝是用物理或化學(xué)方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性,以阻止血液凝固。能夠阻止血液凝固的物質(zhì),稱(chēng)為抗凝劑或抗凝物質(zhì)。檢查項(xiàng)目不同,所用的也不同。
當(dāng)往某些溶液中加入一定量的酸和堿時(shí),有阻礙溶液pH變化的作用,稱(chēng)為緩沖作用,這樣的溶液叫做緩沖溶液。弱酸及其鹽的混合溶液(如HOAc與NaOAc),弱堿及其鹽的混合溶液(如NH3·H2O與NH4Cl)等都是緩沖溶液。