對(duì)照的目的是對(duì)檢測(cè)的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行監(jiān)控，因此我們按照檢測(cè)的流程對(duì)對(duì)照進(jìn)行梳理。常規(guī)熒光定量PCR的流程是：樣品采集-運(yùn)輸-樣品處理-核酸提取-反轉(zhuǎn)錄（RNA病毒）-擴(kuò)增-結(jié)果讀取。
支原體（Mycoplasma）是一種大小介于細(xì)菌和病毒之間（0.1 - 0.6μm），沒有細(xì)胞壁、并獨(dú)立生活原核生物，形態(tài)呈高度多形性，呈圓形、絲狀或梨形。由于支原體直徑較小，進(jìn)行除菌過濾是，約1%的支原體可以直接穿過常規(guī)的0.22μm的微孔除菌濾膜，造成細(xì)胞的支原體污染。
常見的 DNA 聚合酶如 Taq、Phanta、Pfu、KOD、Primerstar、Klenow、Bst、Phi29 等等。根據(jù)耐熱性來分可分為耐熱酶和常溫酶。耐熱聚合酶如 Taq、Pfu、KOD、Primerstar 等，常溫聚合酶包括 Klenow、Bst、Phi29 等。根據(jù)保真度來分，高保真聚合酶 Pfu、KOD、Phanta 等，普通聚合酶 Taq 等。
內(nèi)標(biāo)法是將一定量的純物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)物，加入到準(zhǔn)確稱量的試樣中，根據(jù)被測(cè)試樣和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比及其相應(yīng)的色譜峰面積之比，來計(jì)算被測(cè)組分的含量。
細(xì)胞破碎是指利用外力破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞壁,使細(xì)胞內(nèi)容物包括目的產(chǎn)物成分釋放出來的技術(shù),是分離純化細(xì)胞內(nèi)合成的非分泌型生化物質(zhì)(產(chǎn)品)的基礎(chǔ)。結(jié)合重組DNA技術(shù)和組織培養(yǎng)技術(shù)上的重大進(jìn)展,以前認(rèn)為很難獲得的蛋白質(zhì)現(xiàn)在可以大規(guī)模生產(chǎn)。
質(zhì)粒提取的得率和質(zhì)量與很多因素有關(guān)，如宿主菌的種類和培養(yǎng)條件、細(xì)菌細(xì)胞的裂解、質(zhì)?？截悢?shù)、質(zhì)粒的穩(wěn)定性、抗生素、吸附膜的吸附能力、提取操作的熟練程度等等。
ICH指導(dǎo)原則分為四類，Q：質(zhì)量指導(dǎo)原則；S : 安全性指導(dǎo)原則；E : 有效性指導(dǎo)原則；M : 多學(xué)科指導(dǎo)原則
大腸桿菌培養(yǎng)：將接種完成的培養(yǎng)基放入恒溫培養(yǎng)箱或恒溫振蕩培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，即可得到所需的大腸桿菌菌落或種子液。
普通PCR所用的一對(duì)引物中有一個(gè)引物加多了，為正常的三倍只要引物特異性比較好，那么不會(huì)產(chǎn)生大的影響。如果恰巧是加多的這條引物不是很特異的話，也許會(huì)擴(kuò)出來非特異帶。
關(guān)注微信下單
