細(xì)胞株在體外進(jìn)行培養(yǎng),失去了機(jī)體的調(diào)節(jié)和控制,因此,除滿足營養(yǎng)的要求外,還必須使細(xì)胞生存環(huán)境晝接近活體的環(huán)境。外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細(xì)胞的生長。
酸堿緩沖溶液由弱酸及其鹽、弱堿及其鹽組成的混合溶液,能在一定程度上抵消、減輕外加強(qiáng)酸或強(qiáng)堿對溶液酸堿度的影響,從而保持溶液的pH值相對穩(wěn)定。這種溶液稱為酸堿緩沖溶液。
細(xì)胞培養(yǎng)(cell culture)就是從機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個細(xì)胞,然后在適宜的培養(yǎng)基 中,讓這些細(xì)胞生長和增殖。體外細(xì)胞培養(yǎng)最常見的是合成培養(yǎng)基如DMEM,F12,MEM等混合一定比例的牛血清進(jìn)行培養(yǎng);但是大量使用牛血清制品有許多缺陷,如,動物源成分,無法用于臨床研究;成分復(fù)雜,批間差大,質(zhì)量不穩(wěn)定,重復(fù)性差,影響實驗和生產(chǎn),而且極易引起交叉污染;所以無血清培養(yǎng)正在替代有血清培養(yǎng);
染色步驟包括:將培養(yǎng)的細(xì)胞或組織樣品制成單細(xì)胞懸液,然后將細(xì)胞放入管子或酶標(biāo)板中與熒光標(biāo)記或未標(biāo)記的抗體孵育。之后將細(xì)胞放入流式細(xì)胞儀中進(jìn)行分析。
ELISA是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的一種定量分析方法,樣本的處理對于實驗的成功有著舉足輕重的作用。 利用進(jìn)行檢測的樣本類型包括常見的血液(血清、血漿),組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰道分泌物等,這些樣本收集的時間、處理方法和保存都會影響到實驗的結(jié)果。
染色時調(diào)節(jié)pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長,組織酸化而影響細(xì)胞核著色。因此,要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min,這樣可以使細(xì)胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳,可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
細(xì)胞死亡是所有生物的基本過程,通過不同的機(jī)制發(fā)生。程序性細(xì)胞死亡的三種主要類型是凋亡、焦亡和壞死,每一種途徑都使用復(fù)雜的分子和細(xì)胞機(jī)制。盡管每種途徑都有特定的機(jī)制和結(jié)果,但它們具有共同的組成部分和特征。