自然界中,質(zhì)粒是在營(yíng)養(yǎng)充足時(shí)出現(xiàn)的,它在結(jié)構(gòu)、大小、復(fù)制方式,每個(gè)細(xì)菌的拷貝數(shù),在不同的細(xì)菌體內(nèi)的繁殖力不同,在菌種之間的轉(zhuǎn)移力等方面都會(huì)變化,可能最重要的是質(zhì)粒所攜帶的特征的改變。大多數(shù)原核生物的質(zhì)粒是雙鏈環(huán)狀的DNA分子;但是無(wú)論是在革蘭氏陽(yáng)性還是陰性菌體內(nèi)都可以發(fā)現(xiàn)線狀質(zhì)粒。質(zhì)粒大小變化很大,可從幾個(gè)到數(shù)百個(gè)kb。
由于貼壁細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),接觸抑制,長(zhǎng)滿一瓶后貼壁較緊,不易取出。這時(shí)必須用胰蛋白酶或者膠原蛋白酶處理,使其分散開(kāi)后取出,然后在放入新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
當(dāng)細(xì)胞所處溫度低于0°C時(shí),細(xì)胞脫水,細(xì)胞中可溶性物質(zhì)濃度升高,并在細(xì)胞內(nèi)形成冰晶,冰晶的大小對(duì)細(xì)胞的影響是不同的,大冰晶容易造成細(xì)胞膜、細(xì)胞器的損傷和破裂,故造成復(fù)蘇出來(lái)的細(xì)胞存活率、狀態(tài)等與凍存前的狀態(tài)相差甚遠(yuǎn)。因此,我們?cè)趦龃婕?xì)胞的時(shí)候會(huì)采取兩個(gè)措施,一加入低溫保護(hù)劑,二,慢凍細(xì)胞。
目前多數(shù)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基滅菌后會(huì)放置水浴或者烘箱中,需使用的時(shí)候拿出來(lái)直接倒板。但培養(yǎng)基靜置時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),靜置時(shí)間一般不超過(guò)4小時(shí)。靜置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),培養(yǎng)基中瓊脂可能會(huì)少量凝固,形成類似絮狀析出。
免疫熒光(Immunofluorescence,IF)原理免疫熒光技術(shù)是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)。它是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理,先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光基團(tuán),再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)。利用熒光顯微鏡可以看見(jiàn)熒光所在的細(xì)胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質(zhì)和定位,以及利用定量技術(shù)(比如流式細(xì)胞儀)測(cè)定含量。
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)大量培養(yǎng)成為簡(jiǎn)單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞,這是克隆技術(shù)必不可少的環(huán)節(jié),而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。
對(duì)照品(標(biāo)準(zhǔn)品)是執(zhí)行藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)物對(duì)照,是量值傳遞的重要載體,是用來(lái)檢查藥品質(zhì)量的一種特殊的專用量具、測(cè)量藥品質(zhì)量的基準(zhǔn)、確定藥品真?zhèn)蝺?yōu)劣的物質(zhì)對(duì)照,也是作為校正測(cè)試儀器與方法的物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)。
“跑膠”看到這個(gè),已經(jīng)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室學(xué)習(xí)的小伙伴想必不陌生,瓊脂糖凝膠制作膠板從而讓樣品在膠板上產(chǎn)生電泳,簡(jiǎn)稱“跑膠”。通常跑膠分為跑瓊脂糖膠和 SDS-PAGE 膠,當(dāng)然也還有非變性膠,這里主要說(shuō)明上面兩種。
為了構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒的克隆載體,必須組裝合適的啟動(dòng)子,當(dāng)設(shè)計(jì)真核生物的基因須在原核生物中表達(dá)式,常改用原核生物或病毒(噬菌體)基因的啟動(dòng)子,而原核生物基因在真核細(xì)胞中表達(dá)時(shí),仍可用原核生物基因的啟動(dòng)子。