所有從別處轉來的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備,一旦懷疑發(fā)生交叉污染,可做細胞遺傳學方面的鑒定,如發(fā)現原有的細胞遺傳物發(fā)生改變,可以復蘇早期凍存的細胞使用。重要細胞系(株)的傳代工作應由兩人獨立進行。
分枝桿菌的植物細胞內帶有很多的脂類,包圍著在肽聚糖的外邊,因此分枝桿菌一般不容易上色,要歷經加溫和增加上色時間來促進其上色。但分枝桿菌中的分枝菌酸與染劑融合后,就難以被酸堿性脫色劑褪色,故稱抗酸染色。
培養(yǎng)基與菌種分離是從含有多種微生物的樣品中獲得純種微生物的操作技術。菌種分離主要在培養(yǎng)皿上進行,常用的方法是稀釋法和劃線法。使用這兩種方法的目的是是微生物的一個個體通過繁殖,在固體培養(yǎng)基上長出肉眼能見的群體,根據培養(yǎng)特征,用接種針調取所需菌種并在顯微鏡下檢查,證明為單一形狀的菌體。常用的培養(yǎng)基是選擇培養(yǎng)基。
核糖核酸酶A(RNase A)來源于牛胰臟,是一種內切核糖核酸酶,可特異攻擊RNA上嘧啶殘基的3’端,切割胞嘧啶或尿嘧啶與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵,反應終產物是3’嘧啶核苷酸和末端帶3’嘧啶核苷酸的寡核苷酸。無輔助因子及二價陽離子存在時,核糖核酸酶A的作用可以被胎盤RNA酶抑制劑(RNasin)或氧釩一核糖核苷復合物(vanadyl—ribonuclosidecomplex,VRC)所抑制。RNase A的反應條件極廣,且極難失活。在低鹽濃度(0~100 mmol/l NaCl)下,RNase A切割單鏈和雙鏈RNA、DNA:RNA雜交體中的RNA;當NaCl濃度為300 mmol/l?;蚋邥r,RNase A就特異性切割單鏈RNA。去除反應液中的RNase A,通常需要蛋白酶K處理、酚反復抽提和乙醇沉淀。