瓊脂糖凝膠電泳鑒定質(zhì)粒DNA
瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定和純化DNA片段的常用方法。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負(fù)電荷，在電場中向正極移動。
由于糖磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì)，相同數(shù)量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此它們能以同樣的速度向正極方向移動。
不同濃度瓊脂糖凝膠可以分離從200bp至50kb的DNA片段。在瓊脂糖溶液中加入低濃度的溴化乙錠(ethidum bromide ,EB)，在紫外光下可以檢出 10ng的DNA條帶，在電場中，pH8.0條件下，凝膠中帶負(fù)電荷的DNA向陽極遷移。
質(zhì)粒DNA提取方法
1，堿裂解法
2，煮沸裂解
3，羥基磷灰石柱層析法
4，質(zhì)粒DNA釋放法
5，酸酚法等。
選擇哪一種方法取決于以下幾個因素
1，質(zhì)粒的大小
2，大腸桿菌菌株
3，裂解后用于純化的技術(shù)和實驗要求
