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發(fā)布日期:2023/7/17 10:04:00

  實驗室細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染包括細(xì)菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑點污染、真菌污染和原生動物污染。


  1.細(xì)菌污染


  細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細(xì)砂狀。根據(jù)感染菌的種類不同,可能會呈現(xiàn)不同的形狀,培養(yǎng)液一般會變得渾濁、黃色,對細(xì)胞生長有明顯影響。


  2.霉菌污染


  正常情況下,培養(yǎng)基在 37℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)兩三天,在倒置顯微鏡下仍保持透明,無雜質(zhì)。一旦出現(xiàn)絮狀雜質(zhì),顯微鏡下可見絲狀和團塊狀漂浮物,菌絲明顯。此時,雖然細(xì)胞仍在生長,但它們的生命狀態(tài)會在長時間后逐漸惡化。


  3.支原體污染


  支原體是隱蔽的污染物,不能通過過濾去除。顯微鏡下沒有任何可見的支原體污染跡象,比如細(xì)胞病變和濁度或 pH 值變化(即使在嚴(yán)重污染的培養(yǎng)基中),這樣就會導(dǎo)致我們產(chǎn)生錯誤的安全感。而在牛血清中,支原體是最常見的微生物之一。


  4.黑點污染


  黑色的游動點能穿透濾膜并在空氣中擴散。它們在低倍鏡下顯示為黑色圓點,在高倍鏡下顯示為可移動的黑色斑點。培養(yǎng)液也不渾濁,一般影響較小,因此細(xì)胞仍可使用。通常,黑點污染后,細(xì)胞生長良好,運動物體無明顯增加,培養(yǎng)基的顏色和透明度無明顯變化。在同一批血清培養(yǎng)的細(xì)胞中也可以發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象。


  5.真菌污染


  真菌污染后,培養(yǎng)基一般清澈,保持原色。細(xì)絲可以在顯微鏡下觀察到。最初,一些真菌類似于死細(xì)胞碎片,但其中許多清晰可見,看起來像珊瑚,比較容易區(qū)分。此外,它們會慢慢長出細(xì)細(xì)的黑色細(xì)絲,因為它們生長得比較慢,不像細(xì)菌那樣容易被發(fā)現(xiàn),一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基被污染,它們將很難存活。


  6.原生動物污染


  原生動物污染后,細(xì)胞培養(yǎng)基變得輕微渾濁。在顯微鏡下,大量的小點來回移動。雖然此時細(xì)胞仍能生長,但繁殖速度減慢,細(xì)胞生長狀態(tài)不好,邊緣不清,變得不透明。原生動物與細(xì)胞形成共生關(guān)系。同時,原生動物與細(xì)胞競爭營養(yǎng)。這種共生現(xiàn)象非常普遍,但以細(xì)胞為主,因為原生動物的數(shù)量相對較少,因而對細(xì)胞的正常生長沒有影響,只有當(dāng)它們達到一定數(shù)量時,才最終爆發(fā)成為惡性循環(huán)。


  細(xì)胞培養(yǎng)過程中細(xì)胞受到污染的原因


  1,取放細(xì)胞時引起的污染


  細(xì)胞培養(yǎng)過程中,取放細(xì)胞是基本的操作,培養(yǎng)房開關(guān)門的瞬間,環(huán)境中的微生物或多或少會進入培養(yǎng)箱中,而且內(nèi)外溫差導(dǎo)致內(nèi)門冷凝水的產(chǎn)生,極易吸附微生物,都是造成培養(yǎng)箱污染的風(fēng)險因素。


  2,滅菌不徹底造成的二次污染


  細(xì)胞培養(yǎng)過程中,因其它操作問題(如培養(yǎng)基潑灑,水盤污染等),造成培養(yǎng)房的大規(guī)模污染也時常會發(fā)生,此時就需要對培養(yǎng)箱進行滅菌消毒,常規(guī)的消毒(如紫外照射)只能達到表面消毒的效果,特別是對真菌等頑固性污染,無法進行徹底滅菌,導(dǎo)致后續(xù)培養(yǎng)過程中細(xì)胞污染頻發(fā)。

 

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