實驗室細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染包括細(xì)菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑點污染、真菌污染和原生動物污染。
1.細(xì)菌污染
細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細(xì)砂狀。根據(jù)感染菌的種類不同，可能會呈現(xiàn)不同的形狀，培養(yǎng)液一般會變得渾濁、黃色，對細(xì)胞生長有明顯影響。
2.霉菌污染
正常情況下，培養(yǎng)基在 37℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)兩三天，在倒置顯微鏡下仍保持透明，無雜質(zhì)。一旦出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，顯微鏡下可見絲狀和團塊狀漂浮物，菌絲明顯。此時，雖然細(xì)胞仍在生長，但它們的生命狀態(tài)會在長時間后逐漸惡化。
3.支原體污染
支原體是隱蔽的污染物，不能通過過濾去除。顯微鏡下沒有任何可見的支原體污染跡象，比如細(xì)胞病變和濁度或 pH 值變化（即使在嚴(yán)重污染的培養(yǎng)基中），這樣就會導(dǎo)致我們產(chǎn)生錯誤的安全感。而在牛血清中，支原體是最常見的微生物之一。
4.黑點污染
黑色的游動點能穿透濾膜并在空氣中擴散。它們在低倍鏡下顯示為黑色圓點，在高倍鏡下顯示為可移動的黑色斑點。培養(yǎng)液也不渾濁，一般影響較小，因此細(xì)胞仍可使用。通常，黑點污染后，細(xì)胞生長良好，運動物體無明顯增加，培養(yǎng)基的顏色和透明度無明顯變化。在同一批血清培養(yǎng)的細(xì)胞中也可以發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象。
5.真菌污染
真菌污染后，培養(yǎng)基一般清澈，保持原色。細(xì)絲可以在顯微鏡下觀察到。最初，一些真菌類似于死細(xì)胞碎片，但其中許多清晰可見，看起來像珊瑚，比較容易區(qū)分。此外，它們會慢慢長出細(xì)細(xì)的黑色細(xì)絲，因為它們生長得比較慢，不像細(xì)菌那樣容易被發(fā)現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基被污染，它們將很難存活。
6.原生動物污染
原生動物污染后，細(xì)胞培養(yǎng)基變得輕微渾濁。在顯微鏡下，大量的小點來回移動。雖然此時細(xì)胞仍能生長，但繁殖速度減慢，細(xì)胞生長狀態(tài)不好，邊緣不清，變得不透明。原生動物與細(xì)胞形成共生關(guān)系。同時，原生動物與細(xì)胞競爭營養(yǎng)。這種共生現(xiàn)象非常普遍，但以細(xì)胞為主，因為原生動物的數(shù)量相對較少，因而對細(xì)胞的正常生長沒有影響，只有當(dāng)它們達到一定數(shù)量時，才最終爆發(fā)成為惡性循環(huán)。
細(xì)胞培養(yǎng)過程中細(xì)胞受到污染的原因：
1，取放細(xì)胞時引起的污染
細(xì)胞培養(yǎng)過程中，取放細(xì)胞是基本的操作，培養(yǎng)房開關(guān)門的瞬間，環(huán)境中的微生物或多或少會進入培養(yǎng)箱中，而且內(nèi)外溫差導(dǎo)致內(nèi)門冷凝水的產(chǎn)生，極易吸附微生物，都是造成培養(yǎng)箱污染的風(fēng)險因素。
2，滅菌不徹底造成的二次污染
細(xì)胞培養(yǎng)過程中，因其它操作問題（如培養(yǎng)基潑灑，水盤污染等），造成培養(yǎng)房的大規(guī)模污染也時常會發(fā)生，此時就需要對培養(yǎng)箱進行滅菌消毒，常規(guī)的消毒（如紫外照射）只能達到表面消毒的效果，特別是對真菌等頑固性污染，無法進行徹底滅菌，導(dǎo)致后續(xù)培養(yǎng)過程中細(xì)胞污染頻發(fā)。
